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深入了解一步法ELISA试剂盒

人阅读 发布时间:2022-08-19 12:49

酶联免疫吸附测定 (ELISA) 是一种免疫学技术,用于检测和测量特定蛋白质,如生物样品中的抗体、抗原和激素等。
 



如下图所示:我们将从以下两个方面对试剂盒进行研究:


 



首先我们从ELISA试剂盒的产品组成去了解试剂盒:在科研实验中一般采用试剂盒进行测定。ELISA试剂中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。详情如下图:

 



然后我们从ELISA试剂盒的性能方面去了解:
1、检测范围:
建立线性范围:需测定9-11个浓度水平,每个浓度水平重复测定3-4次。
验证标称线性参数:需测定4-6个浓度水平,每个浓度水平重复测定3-4次。
所有样本应在一次运行中或几次间隔很短的运行中随机测定,最好在一天之内完成。
2、灵敏度:
示例:人 IL-13 的最低可检测浓度为 0.1 pg/ml (6 次独立实验的平均值)。 10 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两倍 SD,计算最低可检测浓度。
注意:灵敏度跟检测范围最低点不相等。
3、稳定性(重复性、精密性):
酶标板内精密度 3 个已知浓度的样本酶标板内重复测定 20 次,评估酶标板内的精密度。酶标板间精密度 3 个已知浓度的样本酶标板间重复检测 6 次,评估酶标板间的精密度。 试剂盒一般板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% (统计学概念) 所有样本应在一次运行中或几次间隔很短的运行中随机测定,最好在一天之内完成。 批内精密度:是众多种类精密度中最基本的一个,它是在严格的相似条件下,所得到的最佳的精密度。 批间精密度:指在同一实验室,由同一(组)操作员在同一仪器上,使用同一方法和同种、同一批号试剂,在一段时间内(一般为一个月或20个工作日)对同一测试样品(常用质控品)测量结果的精密度。 我们的试剂盒控制板内,批内CV值在10%内,批间CV值在15%内。
4、准确度(回收率):
示例:5 份健康人血清中加入 3 个不同浓度水平的人 IL-13,未加人 IL-13 的血清作为本底,计算回收率。回收率的范围从 82 %至 110 %,平均回收率为 98 %。


现在我们了解了产品的组成,那让我们来看看实验中所需要的仪器和设备吧!
 

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